短小芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质研究

摘要 从土壤样品中通过筛菌过程获得一株产脂肪酶的菌株，经16S rRNA 鉴定属于短小芽孢杆菌，根据已报道的来源于芽孢杆菌的脂肪酶基因设计引物，克隆获得其全长基因，命名为lipS6，大小为648 bp，编码215个氨基酸，经比对其与已报道的脂肪酶基因B26 有96%的同源性。构建重组表达质粒pET32a-lipS6，在大肠杆菌中实现了可溶表达，酶活达到2 000 U/mL。重组脂肪酶LipS6的最适温度为30℃，最适pH为9，低浓度的Ca2+与Mn2+对其有很明显的激活作用，疏水性有机溶剂对其毒害作用小，在正己烷体系中可以催化酯化反应，最适酯化底物酸为十四酸，底物醇为正丁醇