莲藕根尖染色体制片与免疫荧光染色技术的优化

摘要 在细胞遗传学研究中，莲藕根尖染色体制片比较困难，研究了莲藕根尖染色体制片过程中适宜取材的根尖长度、有丝分裂指数、预处理试剂和处理时间、固定时间、酶解与低渗时间等相关因素，并对莲制片进行了免疫荧光染色。结果表明：根尖长为1.5 cm左右时有丝分裂指数最高，预处理采用冰水冷冻处理24 h分裂相较多，染色体形态清晰；用4%多聚甲醛固定1h，染色体形态较好；采用2.5%纤维素酶和2.5%果胶酶混合液37℃消化30 min，酶解较彻底，细胞质残留少，染色体分散良好；1×PBS低渗30 min，染色体形态较好；免疫荧光染色后经检测可观察到较强的信号