差示扫描量热法分析光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 TXT基序对抗冻活性的影响

摘要 研究光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914及其突变体的原核表达及活性,推测TXT基序的突变对昆虫抗冻蛋白抗冻活性的影响。通过定点突变新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白apafp914基因TXT基序的规则位点个数,并亚克隆至pET32a原核表达载体,转化大肠杆菌,Ni-NTA纯化得到融合蛋白TrxA-ApAFP914及3种突变体蛋白;利用SwisS-Model服务器预测分析了ApAFP914蛋白的三维结构;通过差示扫描量热法测定TrxA-ApAFP914及其突变体的热滞活性。结果显示,4种融合蛋白分子量均在30 kD左右;且突变蛋白TrxA-A19T具有最高的热滞活性,而突变体TrxA-T33F和TrxA-T33&45F的热滞活性显著低于未突变的TrxA-914。研究结果表明昆虫抗冻蛋白的TXT基序越规则其具有的热滞活性越高