粟酒裂殖酵母中Shy1定位及功能的研究

摘要 旨在揭示芽殖酵母线粒体蛋白SHY1（YGR112W）在粟酒裂殖酵母中同源蛋白Shy1的功能。借助基因敲除方法获得shy1基因缺失菌株获Δshy1，并观察其在以甘油为唯一碳源的非发酵培养基上的生长表型；生物信息学分析显示粟酒裂殖酵母Shy1在N端含有大概30个氨基酸的线粒体定位序列（MTS），为进一步确定Shy1蛋白的定位，借助nmt1启动子调控下的Shy1蛋白C端GFP荧光标记，观察GFP绿色荧光位置。最后利用Western blotting检测shy1的缺失对线粒体蛋白的影响。研究结果表明，shy1基因缺失菌株在以甘油为唯一碳源的非发酵培养基上表现出生长缺陷，是线粒体呼吸缺陷型菌株；当GFP标记于nmt1启动子调控下的Shy1蛋白C端时，绿色荧光观察确定Shy1蛋白定位在线粒体；Western blotting检测结果显示shy1缺失导致线粒体相关蛋白的表达量明显下降；结果表明，粟酒裂殖酵母Shy1定位于线粒体且是线粒体呼吸链正常发挥功能所必须的