节瓜ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化

摘要 旨在开展节瓜种质资源分类鉴定与遗传多样性研究。通过正交试验设计与单因素分析相结合的方法，对节瓜ISSR-PCR反应体系5个因素（模板DNA浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、引物浓度与Taq聚合酶浓度）在4个水平上进行优化分析，建立了节瓜稳定可靠且具丰富多态性的最佳反应体系，进而对引物退火温度进行梯度试验分析。结果表明，20μL节瓜ISSR-PCR最佳反应体系为70ng模板DNA、0.2mmol/LdNTP、1.2mmol/LMg2+浓度、0.96μmol/L引物、0.8UTaqDNA聚合酶和2.0μL10×buffer；引物IS807最佳退火温度为53℃。以此为基础，利用4条引物对4份节瓜种质进行最佳反应体系稳定性验证，证明该体系稳定可靠、扩增谱带清晰、多态性丰富且重复性较好