谷胱甘肽合成酶系CLEAs的制备及应用

摘要 为在谷胱甘肽合成工艺中降低成本,同时能够实现酶的可存储性、商品化性,将谷胱甘肽合成酶系经过合适的沉淀剂沉淀,戊二醛交联制备成共固定交联酶聚集体。通过优化沉淀条件,交联条件,蛋白浓度及添加剂的使用,最终得到最优的制备方法为：在4℃,30 g/L蛋白浓度条件下,加入PEI-600（添加剂w∶酶液蛋白w=1∶5）与酶液进行充分混合,然后加入60%饱和度硫酸铵沉淀4 h,最后以0.5%戊二醛进行交联。最终蛋白沉淀率为94.9%,酶活回收率为48.2%,单位CLEAs的酶活为4.9 U/g,分别相比对照组的28.7%及2.57 U/g提高了19.5%和2.33 U/g,GSH最高产量达到11.26 g/L,在转化第12批次时GSH产量为9.03 g/L,相对酶活力为78.4%,4℃条件下储藏33 d后相对酶活力为92.12%。经优化制备条件后得到的谷胱甘肽合成酶系CLEAs有较高的初始酶活力,能稳定转化10批次以上,储藏稳定性佳,具有优良的工业化前景