糖化酶、木聚糖酶融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达

摘要 通过RT-PCR方法,以埃默森篮状菌(Talaromyces emersonii)总RNA为模板,克隆出糖化酶(glucoamylase,amyA)基因的成熟肽编码序列(1 857 bp),编码618个氨基酸;以类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)H10-3基因组DNA为模板,克隆出木聚糖酶(xylanase A,xynA)基因的成熟肽编码序列(636 bp),编码211个氨基酸。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)得到拼接片段amyA-l-xynA,并将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,得到重组质粒pPIC9-amyA-l-xynA,重组质粒线性化后经电击转化到毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中,得到了表达成功的工程菌ALX2。在ALX2发酵上清液中同时检测到糖化酶活性(10.7 U/mL)和木聚糖酶活性(51.8 U/mL)