家蝇伴侣蛋白CCTδ基因克隆、序列分析及表达模式的研究

摘要 旨在对家蝇伴侣蛋白CCTδ基因进行cDNA克隆、序列分析, 并对其时空表达模式进行初步探索。采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到家蝇CCTδ基因, 以该基因的cDNA文库质粒为模板, 通过PCR的方法进行扩增。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行结构与功能分析, 构建系统进化树。取家蝇不同生活史时期虫体(卵、各龄幼虫、蛹、雄雌成虫), 3龄幼虫不同组织部位(体壁、气管、唾液腺、脂肪体、马氏管及中肠), 采用实时荧光定量PCR分析CCTδ基因在家蝇不同发育阶段和组织部位的表达情况。结果显示, 经PCR扩增后, 得到了1 600 bp左右的特异性家蝇CCTδ基因片段；CCTδ基因ORF全长1 602 bp, 编码533个氨基酸, 理论分子量57.16 kD, 等电点为7.50；二级结构主要以α-螺旋和不规则卷曲为主；进化树分析显示其具有较好的保守性, 与中华按蚊的遗传距离较近。时空表达谱显示：该基因在家蝇不同发育时期均有表达, 以蛹期表达量最高；在3龄幼虫不同组织中, 以气管表达量最高。成功克隆了家蝇CCTδ基因并初步探索了其时空表达模式