柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3基因在毕赤酵母中的表达及分析

摘要 旨在真核表达系统中高效表达柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Eimeria tenellacalcium-dependent protein kinase-3,EtCDPK3),获得有活性的天然蛋白,利用毕赤酵母表达系统对该基因进行了表达。将EtCDPK3基因连接到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建重组质粒pPIC9K-EtCDPK3。重组质粒通过电击转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞。重组酵母细胞在含1%甲醇的BMMY培养基中诱导产生目的蛋白,培养收集1-4 d的部分上清。经SDS-PAGE检测,所表达的蛋白相对分子质量约为49 kD。Western blotting表明,该蛋白能与兔抗EtCDPK3血清特异性结合。结果表明,柔嫩艾美耳球虫CDPK3基因在毕赤酵母中成功地进行了表达