白喉毒素突变体CRM197在白喉杆菌中的表达纯化

摘要 CRM197是一种白喉毒素突变体，第52位的甘氨酸突变为谷氨酸，作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将阐述一种新的生产CRM197方法。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pCKM4.1中，表达质粒pCKM5.1电转化至大肠杆菌 E. coli S17-1中，通过结合转移转化至白喉杆菌(ATCC ? 27010 TM的白喉杆菌)中，载体上的导肽序列可以使得CRM197作为可溶性蛋白分泌到胞外表达，CRM197蛋白可占到菌体总蛋白的70%。增强对铁的调控，进一步优化培养基及发酵条件以提高产量。经过Q膜、硫酸铵沉淀、阴离子交换纯化步骤获得纯度达到95%的CRM197样品，提高了蛋白得率，节约了纯化时间和成本