磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的原核表达及单克隆抗体制备

摘要 人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是一个肝癌潜在的诊断标志物和治疗靶点。为获得抗GPC3单克隆抗体，用PCR方法克隆GPC3基因，利用酶切位点将该序列插入pGEX-2T载体，构建了pGEX-2T-gpc3表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株，经IPTG诱导，获得高效表达。经纯化后获得分子量为58 kD的蛋白。以该重组蛋白为免疫原，通过免疫BALB/c小鼠，经过细胞融合和筛选获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F3。Western blot分析显示，该抗体具有较好的特性，可用于GPC3蛋白的功能和应用研究