丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原

摘要 以茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)的基因组DNA为模板,PCR扩增出转谷氨酰胺酶酶原基因(pro-trans-glutaminase,pro-TG)),PCR产物连接到pMD18-T克隆载体后亚克隆到表达载体pET-22b(+),转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)。重组大肠杆菌经IPTG诱导后,转谷氨酰胺酶酶原(pro-TG)主要以可溶性蛋白表达。菌体离心后用丙酮高速搅拌破碎细胞,亲和层析成功地纯化到了转谷氨酰胺酶酶原。转谷氨酰胺酶酶原经胰蛋白酶切割激活后其酶活为502.8 U/g CDM(菌体干重)。采用BSA交联试验证实成熟的转谷氨酰胺酶(TG)具有功能。采用丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原对大规模工业化生产转谷氨酰胺酶进行了有益的探索