云南松基因组微卫星富集文库的构建

摘要 采用磁珠富集法构建云南松微卫星富集文库。云南松基因组DNA 经Rsa Ⅰ酶切，与特定接头连接，再用接头特异#br# 引物进行PCR 扩增。连接扩增产物与用生物素标记的(AG)12、(AT)12、(CG)12、(GT)12、(ACG)12、(ACT)12 和(CCA)8#br# 探针杂交，通过链霉亲和素偶联的磁珠捕捉含接头和微卫星序列的片段并扩增，将获得的片段连接到pMD-19T 载体上，转化至大#br# 肠杆菌JM109 感受态细胞中，成功构建了云南松微卫星富集文库。通过PCR 检测从文库中筛选阳性克隆，在383 富集阳性菌落中#br# 获得阳性克隆257 个，经测序分析，在获得的159 条序列中，有143 条含有SSR， 其中完美型占65.73%， 非完美型占23.78%， 混#br# 合型占10.49% 。结果表明，磁珠富集法构建云南松基因组微卫星文库高效、可行的，文库的构建为微卫星位点的分离、遗传多样#br# 性的分析等奠定基础