武夷菌素产生菌Fosmid文库的构建及文库探针的获得

摘要 以不吸水链霉菌武夷变种CK-15为材料,提取基因组DNA,经Sau 3AⅠ部分酶切后回收35-40 kb之间的片段,连接到pCC1FOS载体上,经过包装转染涂布后构建得到了CK-15基因组的Fosmid文库,文库的滴度为8.8×10~5CFU/mL。随机挑取16个阳性克隆,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳分析,样品插入片段平均长度大于35 kb,插入率为100%,符合构建文库的要求。根据多氧霉素、尼克霉素生物合成基因及大环内酯类聚酮合成酶基因(PKS)设计特异性引物,以基因组为模板进行PCR扩增,筛选特异性引物探针。结果用大环内酯类聚酮合成酶基因设计引物扩增出1 693 bp的片段经Blast比对其与大环内酯类抗生素生物合成基因相似性为95%以上。武夷菌素产生菌CK-15 Fosmid文库的构建及文库探针的获得,为武夷菌素生物合成基因的克隆奠定了基础