木糖异构酶基因xylA的克隆及其表达载体的构建

摘要 木糖异构酶基因xylA是一种正向选择标记基因,在植物基因工程中使用该标记可以获得安全的转基因植物。构建了以xylA基因为选择标记的植物表达载体。从大肠杆菌Top10中扩增出xylA基因,插入到质粒pCAMBIA2301的XhoI位点,通过酶切和PCR检测插入片段的正确性,得到载体pCAMBIA2301-xylA,将pBI121载体上的‘35S-GUS-Nos’表达框插入到pCAMBIA2301-xylA的EcoR I和Hind III位点。得到中间载体pCAMBIA2301-xylA-GUS,用SacI和SmaI切下克隆载体上的CBF1基因替代pCAMBIA2301-xylA-GUS中的GUS片段,用电转化法将获得的表达载体转化到农杆菌中,为将来获得安全的转基因抗寒植株奠定基础