一种大量提取红豆杉中总RNA的方法研究

摘要 旨在确定高质量红豆杉中总RNA的提取和纯化工艺条件。以湖南长沙红豆杉叶为材料,以Trizol和CATB两种植物RNA通用提取方法为基础,以RNA的浓度、OD260/OD280及OD260/OD230的比值为标准,考察提取方法、提取试剂、提取时间等因素对RNA提取率的影响,优化了红豆杉叶中总RNA的提取方法;通过对比PVP法、β-巯基乙醇法、高盐沉淀法、低浓度乙醇沉淀法、凝胶柱层析法五种不同纯化方法来探讨对红豆杉RNA的影响。考虑到成本的问题,选择使用Trizol法提取红豆杉总RNA,确定了较优的提取条件：红豆杉叶与Trizol提取液的作用体积确定为3∶40;裂解时间确定为5 min;氯仿与水液的作用体积确定为1∶5。实验表明凝胶柱层析法能显著的提高红豆杉总RNA的纯度并能得到富含miRNA的小分子RNA。最终可得到浓度约为1 000 μg/mL,OD260/OD280在2.00-2.20之间及OD260/OD230大于1.7的高质量RNA样品。与现有的提取方法相比,本方法提取的红豆杉总RNA具有很高的质量和纯度,且大大降低了提取成本,并首次实现了植物总RNA的大量提取