S. suis 2 中国强毒株烯醇化酶 Enolase 基因的分子克隆及蛋白生物功能研究

摘要 对中国强毒株 S. suis 2 烯醇化酶 Enolase 进行克隆表达、定位分析、酶活性检测及免疫相关功能研究,探讨 Enolase 在 S.suis 2 致病中的作用。基于 S. suis 2 05ZYH33 全基因组测序,对 Enolase 编码基因进行生物信息学分析。构建 pET32a∷eno 重组表达质粒,转化入 E. coli BL21 中诱导表达,利用 His-Beads 和 FPLC 纯化后获得 Enolase 重组蛋白。对纯化后的 Enolase 进行酶活性检测,鉴定其糖代谢功能。然后利用 FCM 分析 Enolase 在 S. suis 2 的定位情况,最后通过外周血单核细胞 MTT 实验检测 Enolase 对 PBMCs 活性的影响。同源性分析发现 S. suis 2 eno 与多种细菌中 eno 高度同源。SignalP 和 TMHMM 分析发现 Enolase 没有信号肽也没有跨膜区。eno 分子克隆并测序显示长度为 1 308 bp。重组质粒经诱导表达并纯化后,获得 75 kD 的 Enolase 蛋白。纯化的重组 Enolase 有将 2-PEG 转化成 PEP 的能力。FCM 分析表明 Enolase 也存在于细菌表面。MTT 测试表明 Enolase 能够引发 PBMCs 活性的下降。Enolase 不仅在 S.suis 2 体内参与基础代谢活动,同时也存在于 S.suis 2 表面,可能通过破坏单核细胞参与感染过程