丙酮酸羧化酶基因的过量表达对富马酸代谢的影响

摘要 旨在研究丙酮酸羧化酶胞质同工酶(PC)基因在毕赤酵母中的过量表达对TCA还原途径碳源分流及草酰乙酸、L-苹果酸生产的影响,构建了表达载体pPIC3.5K-PC,并转化了毕赤酵母GS115。转化子经过表型鉴定,PCR分析和G418浓度梯度筛选获得了高拷贝的重组子(pas-01)。甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE分析及PC活性检测,发现酶活提高了3倍,说明PC在毕赤酵母中获得了成功表达。以pPIC3.5K转化菌为对照,对该重组子进行了草酰乙酸及苹果酸的发酵研究。结果显示,草酰乙酸产量(177.4 mg/L)提高了109.6%,L-苹果酸的产量(127.45 mg/L)提高33.7%,菌体生物量提高15.7%,表明PC的过量表达有助于L-苹果酸和草酰乙酸的积累,并且对菌体的生长有一定的促进作用