海洋真菌灰绿曲霉地标蛋白编码基因AgTeaA的克隆与序列分析

摘要 为考察灰绿曲霉中地标蛋白AgTeaA对菌丝极化生长的作用,首先需要获得AgTeaA基因序列的相关信息。通过简并PCR的方法得到AgTeaA基因编码区的一段序列,以已知序列为基础通过染色体步移的方法获得基因全长及两端侧翼序列,然后通过逆转录PCR的方法确定出氨基酸序列,并利用相关生物学软件进行蛋白结构域的分析和系统进化树的构建。结果显示,AgTeaA基因编码区全长4 706 bp,对应氨基酸全长为1 477 aa,在256-320 bp,733-780 bp,1064-1150 bp处各有一个内含子。与粟酒裂殖酵母Tea1蛋白和构巢曲霉TeaA蛋白相似的是,AgTeaA在290-339 aa,340-390 aa处各有一个Kelch结构域,在818-899 aa,938-999 aa,1 021-1 116 aa,1 183-1 335 aa处各有一个卷曲螺旋(coiled coil)结构域