盐芥TsGPX3基因的克隆、亚细胞定位与原核表达

摘要 以盐芥（Thellungiella salsuginea）为材料，获得TsGPX3的cDNA全长序列，其开放阅读框（ORF）序列长591 bp，编码196个氨基酸，具有GPXs家族的3个保守的特征结构域。系统进化分析显示，TsGPX3与同属于十字花科的萝卜RsGPX3、油菜BnGPX3和花椰菜BoGPX3等具有较高的同源性。构建植物表达载体pRTL2-TsGPX3-GFP，利用PEG转化拟南芥原生质体细胞进行瞬时表达，发现TsGPX3蛋白主要定位在细胞膜上。构建原核表达载体pET-TsGPX3，采用不同浓度IPTG对转入E.coli BL21（DE3）的pET-TsGPX3进行诱导表达，获得了分子量约为27 kD的蛋白，该蛋白在37℃、诱导培养5 h时可获得较高的表达量