三疣梭子蟹nm23基因克隆及在卵巢发育中的表达分析

摘要 Nm23基因编码的核苷二磷酸激酶（NDPK）参与调控生物体的多项生理功能，包括生长、发育、分化和肿瘤转移等。根据三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）转录组数据库中的nm23同源序列，利用cDNA末端快速扩增技术（RACE）首次克隆获得了三疣梭子蟹nm23基因的全长cDNA序列（GenBank登录号：KP027331）。该序列全长777 bp，编码一个151个氨基酸的蛋白，该蛋白包含一个典型的核苷二磷酸激酶（NDPK）区域，具有NDPK活性位点和多肽结合位点。推导的氨基酸序列与已知甲壳动物的nm23一致性达到90%以上，与脊椎动物第一类nm23的一致性也达到70%以上。系统进化树分析发现第一类nm23与第二类nm23分别聚为一支，甲壳动物nm23属于第一类，且与nm23-1和nm23-2亲缘关系较近。采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术分析了三疣梭子蟹nm23的组织差异表达及其在卵巢发育过程中的表达水平变化，结果表明nm23在三疣梭子蟹各组织内均有表达，其表达水平在眼柄、肌肉和Y器中最高，卵巢和肝胰腺次之。在三疣梭子蟹卵巢发育过程中，卵巢中nm23的表达水平在Ⅰ期最高，之后随着卵巢发育的进行，其表达水平逐渐下降，并在成熟期降至最低，这表明nm23可能参与调控三疣梭子蟹的卵巢发育