慢病毒介导沉默PD-L1基因在乳腺癌细胞中的表达

摘要 构建含细胞程序性死亡因子配体1（PD-L1）基因的慢病毒载体三质粒体系,并检测其在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达情况。pMAGic 7.1慢病毒表达载体与质粒△8.91和pVSVG用聚乙烯亚胺（PEI）共转293T包装病毒,感染并筛选获得MDA-MB-231稳转细胞系,检测PD-L1表达情况。（1）MDA-MB-231在3种乳腺癌细胞中PD-L1表达量最高；（2）三质粒转染293T细胞48 h后荧光强度增强,达到90%以上；用病毒感染MDA-MB-231细胞,48 h获得20%左右荧光强度；（3）经筛选的MDA-MB-231稳转细胞系在mRNA水平和蛋白水平低表达PD-L1,其中由pMAGic-sh1包装的病毒干扰能力最强；（4）分别加入病毒后,干扰组细胞增殖能力下降,pMAGic-sh1干扰组细胞在加入病毒7 d后生长速度约为阴性对照的64.77%；（5）混合淋巴实验显示,sh-1干扰组的肿瘤抑制率为35.8%,是正常组的3.06倍,且干扰组的T淋巴细胞活性显著增强。成功通过PEI转染试剂建立了三质粒慢病毒包装体系,该体系获得的慢病毒可有效干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞中PD-L1的表达量,所得的干扰细胞株细胞增殖能力下降,可增强T细胞增殖活性及肿瘤细胞杀伤活性