点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究

摘要 旨在克隆点青霉菌（Penicillium notatum）中的葡萄糖氧化酶基因（GOD）,在毕赤酵母（Phchia pastoris）中异源表达,纯化并研究其酶学性质。利用PCR技术从点青霉 No.8312菌株的基因组 DNA中克隆得到 GOD基因,将该基因克隆到穿梭载体pMD-AOX上并在毕赤酵母X33中表达,对纯化后的葡萄糖氧化酶的酶学性质进行分析。结果显示,X33-GOD可高表达具有活性的GOD,在30℃、pH6.5的条件下,其培养液上清GOD酶活可达496 U/mL,比活123.0 U/mg;重组表达的葡萄糖氧化酶最适温度为40-45℃,最适pH为6.0,酶的稳定性研究表明,该酶在pH3.5-7.0区间和温度低于50℃下稳定。1 mmol/L Zn2+对其有激活作用;Ag+对该酶活性有较大抑制作用。构建出GOD的高产毕赤酵母工程菌株,与点青霉GOD相比,具有更高的发酵酶活和 比活