棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)G4株Ha109蛋白的原核表达及抗体制备

摘要 根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopoly-hedrovirus,HaSNPV)G4株基因组全序列,设计引物,利用PCR方法扩增出开放阅读框(open reading frame,ORF)109编码片段并将其克隆至载体pGEM-TEasy,测序正确后将其亚克隆至原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导,融合蛋白GST-Ha109在E.coliBL21中以包涵体形式得到高效表达。表达目的蛋白大小为38.5 kD,经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。抗体经1∶6 000倍稀释后用于Western blotting分析,获得特异性显色信号,为深入研究Ha109的功能奠定基础