小鼠LSK及DN原代细胞中基因编辑方法的建立

摘要 小鼠（Mus musculus）免疫系统包含种类众多、功能各异的细胞群体。为了研究小鼠免疫系统的发育机制,需要建立高效的遗传操作技术方法。首先选择Cas9敲入小鼠的DN细胞（CD4-CD8- double negative thymocytes）为研究对象,针对GFP和CD4表面抗原基因设计构建了sgRNA（single guide RNA）,使用小鼠逆转录病毒（Murine stem cell virus,MSCV）为载体实施了基因编辑。通过流式细胞仪分析,检测到GFP和CD4被成功敲除。在此基础上,选取Cas9敲入小鼠的LSK细胞（Lin-Sca1+Kit+）为研究对象,使用同样的方法针对Tcf7基因设计构建了sgRNA并实施基因编辑。基因编辑后,LSK细胞不能正常分化为下游T细胞,但其分化为髓系细胞能力不受影响。这些结果表明,针对小鼠LSK和DN原代细胞实施的基因编辑取得成功