NADPH依赖的甘露醇脱氢酶的重组表达及甘露醇的转化条件

摘要 对NADPH依赖的甘露醇脱氢酶的异源表达和对果糖的转化情况进行分析，为在细胞内构建甘露醇的合成途径奠定基础。构建重组菌株BL21（DE3）/pET28a-mdh，对其进行诱导发酵后，通过His标签对目的蛋白进行纯化，并利用HPLC分析纯化后的甘露醇脱氢酶转化果糖生成甘露醇的情况。成功构建了NADPH依赖的甘露醇脱氢酶重组表达菌株BL21（DE3）/pET28a-mdh，并对表达后的甘露醇脱氢酶进行了纯化，测得纯化后的甘露醇脱氢酶酶活力为270 U/mL。对酶法转化果糖得到甘露醇的转化条件进行优化，确定最佳的转化条件为：当底物浓度为300 g/L，反应初始pH5.8，温度40℃，NADPH终浓度为9 mmol/L时，甘露醇转化率可以达到97.4%。实现了NADPH依赖的甘露醇脱氢酶在大肠杆菌中的活性表达，为进一步研究大肠杆菌合成甘露醇的代谢调控提供了依据