过表达miR-155抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

目的：研究过表达miR-155对BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响。方法：①用重组腺病毒Ad-BMP9（BMP9）诱导C3H10T1/2细胞成骨分化，定量PCR （qPCR）检测miR-155的表达，RT-PCR检测Runx2和ALP的表达。②miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞，qPCR检测miR-155的表达，ALP活性和染色检测早期成骨能力。③miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞，诱导分化14d茜素红S染色检测晚期成骨能力。④miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞，qPCR检测成骨分化相关基因Runx2，OSX，COL1A1，ALP，OCN和OPN的表达。⑤miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞，Western blot检测p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达。⑥qPCR和Western blot分别检测HIF1α和VEGF的mRNA表达水平和蛋白质表达水平。⑦应用荧光素酶报告基因对miR-155的靶基因进行筛选和验证。结果：在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化过程中，过表达miR-155降低ALP活性及染色；减少钙盐沉积；成骨分化相关基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN表达降低；抑制p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达；HIF1α和VEGF的mRNA和蛋白表达水平减少。在对靶基因的检测中，过表达miR-155可以抑制HIF1α蛋白水平的表达，但对其mRNA水平无明显影响。结论：miR-155过表达减弱BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化，可能是通过抑制Smad/BMP信号通路发挥作用，也有可能是通过抑制靶基因HIF1α的表达来发挥作用