小鼠c-Myc基因的克隆表达及其纯化

目的：克隆小鼠c-Myc基因，构建原核表达载体并对其进行蛋白表达及纯化。方法：以TetO-FUW-OSKM质粒为模板经PCR扩增c-Myc基因，再通过基因重组技术与pET-3C载体相连转化大肠杆菌DH5α。经抗性筛选，PCR鉴定阳性重组子，测序正确后，重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3），IPTG诱导蛋白表达，SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定分析。结果：DNA电泳结果证实PCR扩增产物与预期大小一致，DNA测序结果显示与GenBank公布的c-Myc基因序列一致，IPTG诱导SDS-PAGE电泳后，在分子量64kDa左右出现诱导后蛋白新增条带，与预测的c-Myc分子量大小一致。结论：成功地构建了pET3C-Myc原核表达载体，表达并纯化出了c-Myc蛋白，为今后研究c-Myc蛋白及相关蛋白诱导体细胞成多能干细胞打下基础