犬2型腺病毒E1转化细胞的建立

为建立能表达犬2型腺病毒(CAV2)E1基因的辅助细胞,本研究用含CAV2E1基因的重组质粒pcE1t对DK细胞进行转染,经G418的筛选,得到26个细胞克隆。用CAV2E1A特异引物对各细胞克隆进行PCR和RTPCR检测,PCR结果表明转染后的细胞克隆都能扩增出536bp的特异性片段,但仅有6株为RTPCR强阳性,能扩增出652bp的特异带。再对RTPCR强阳性的细胞克隆进行Westernblot分析,最终挑选到一个既能转录E1A基因,又能表达E1B19kD蛋白的克隆细胞株(DKE1)