姜黄素下调mTOR诱导人肺癌A549细胞自噬的研究

摘 要：［目的］ 研究姜黄素诱导人肺癌A549细胞自噬现象及与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的关系。［方法］采用CCK-8法检测姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用；采用吖啶橙染色(AO) 及转染GFP-LC3质粒荧光显微镜下观察姜黄素处理后A549细胞的自噬现象；采用Western blot法检测微管相关蛋白轻链Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链Ⅰ(LC3Ⅰ)、mTOR表达的变化。［结果］ 姜黄素对人肺癌A549细胞增殖有明显抑制作用，且成明显的剂量—时间依赖关系。AO染色结果显示，与对照组相比，姜黄素40μmol/L组及Rapa组细胞内酸性滤泡染成亮红色荧光比例增多；与姜黄素40μmol/L组相比，姜黄素40μmol/L+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组及3-MA组亮红色荧光比例下降。细胞转染GFP-LC3后姜黄素40μmol/L组和Rapa组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显；与姜黄素40μmol/L组相比，姜黄素40μmol/L+3-MA组及3-MA组胞浆内点状的绿色荧光斑点明显比例有所下降。Western blot法检测结果显示，与对照组相比，姜黄素40μmol/L组作用24h后，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达显著升高（P＜0.05），姜黄素40μmol/L + 3-MA组LC3Ⅱ/LC3-Ⅰ表达低于姜黄素40μmol/L组（P＜0.05）。姜黄素40μmol/L组mTOR表达显著下降（P＜0.01），姜黄素40μmol/L+3-MA组mTOR表达高于姜黄素40μmol/L组（P＜0.05）。 ［结论］ 姜黄素能够明显抑制A549细胞增殖并诱导A549细胞发生自噬，同时还能够明显抑制mTOR蛋白的表达水平，其机理可能与mTOR的信号通路有关