Akt抑制剂MK-2206清除衰老神经母细胞瘤细胞的实验研究

摘 要：［目的］ 探讨Akt抑制剂MK-2206清除衰老神经母细胞瘤细胞IMR-32的效果及可能机制。［方法］ 极光激酶A抑制剂MLN8237处理神经母细胞瘤细胞系IMR-32，利用衰老相关β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色检测细胞状态、免疫荧光法检测组蛋白磷酸化和甲基化情况评估细胞衰老状况。CCK-8检测不同浓度MK-2206及MK-2206与MLN8237联合对IMR-32细胞增殖的影响，流式细胞术检测细胞凋亡状况。Western blot法检测MK-2206与MLN8237联合用药对IMR-32细胞 Akt、p-Akt、STAT3和N-Myc表达的影响。［结果］ MLN8237作用IMR-32细胞后，细胞核体积明显增大，细胞呈现大而扁平的衰老状态，细胞蓝染数显著增多；组氨酸 H3 Ser10磷酸化水平和组氨酸 H3 K9甲基化水平显著性升高。Western blot显示衰老IMR-32细胞内磷酸化Akt和STAT3蛋白显著性上调。10μmol/L MK-2206干预衰老细胞72h和96h后细胞存活率分别为（80.13±5.30）%、（74.29±4.06）%，较不干预衰老细胞组显著性下降。在MK-2206与MLN8237联合作用下细胞出现明显凋亡，凋亡率为（15.70±0.97）%，而不干预衰老细胞组细胞凋亡率为（8.81±1.33）%。同时两药联合组胞内p-Akt、STAT3和N-Myc蛋白显著性下调。［结论］ MK-2206可能通过抑制衰老神经母细胞瘤细胞内p-Akt，下调STAT3和N-Myc蛋白的机制，诱导细胞凋亡，从而达到清除MLN8237诱导的衰老细胞目的