泛素特异性蛋白酶15稳定着色性干皮病F蛋白并促进DNA链间交联损伤修复

着色性干皮病F蛋白 (xeroderma pigmentosum group F, XPF) 和切除修复交叉互补组1蛋白 (excision repair cross complementing group 1, ERCC1) 组成一种结构特异性的核酸内切酶 (XPF-ERCC1)复合物，参与DNA链间交联 (interstrand crosslink, ICL) 损伤修复。其中，XPF蛋白的去泛素化修饰对DNA损伤修复的影响尚未见报道。本工作主要研究泛素特异性蛋白酶15 (ubiquitin-specific protease 15, USP15) 对XPF的稳定性及ICL修复的影响。本研究通过蛋白质质谱和Western印迹法分析发现，XPF蛋白与USP15存在相互作用，进而使XPF蛋白去泛素化修饰；采用CRISPR-Cas9技术构建USP15基因敲除的HeLa细胞株 (USP15 KO) 并进行Western印迹分析，结果显示，敲除组XPF蛋白水平低于对照组 (P<0.001)。克隆形成试验显示，在ICL诱导剂顺铂 (cisplatin，DDP) 和丝裂霉素C (mitomycin, MMC) 的作用下，USP15基因敲除的HeLa细胞增殖能力显著降低 (P<0.01)。本研究表明，去泛素化酶USP15是一种重要的DNA修复调节因子，该酶通过稳定XPF蛋白促进由XPF-ERCC1介导的ICL修复。本研究为改善ICL诱导剂类抗癌药物的耐药性提供了理论依据，并为肿瘤的治疗提供了潜在的新靶点