滇龙胆草7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶 基因的克隆与表达分析

克隆滇龙胆7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶基因GrDL7H，并进行表达分析，为龙胆苦苷生物合成途径的解析奠定基础。根据滇龙胆转录组GrDL7H序列，使用RT-PCR(逆转录PCR)和3′RACE(cDNA末端快速扩增)技术从滇龙胆幼叶中克隆该基因及其启动子，并进行序列分析和组织特异性表达分析。结果表明，GrDL7H基因(登录号：KT306971)全长2 154 bp，包含5个外显子和4个内含子，其中GrDL7H基因(登录号：KP340980)开放阅读框长 1 542 bp，编码513个氨基酸；GrDL7H蛋白质相对分子质量为59.08 ku，等电点(pI值)为8.88，属于CYP450蛋白超家族成员，可能定位于叶绿体；GrDL7H蛋白质无信号肽，为亲水稳定蛋白质，主要由α-螺旋和环构成；GrDL7H蛋白质具有CYP450蛋白质保守结构域，功能为参与氧化还原反应；滇龙胆GrDL7H蛋白质与黄金鸡纳树CcDL7H蛋白质的亲缘关系最近；GrDL7H基因启动子主要包含6个光应答元件、1个赤霉素应答元件、6个参与茉莉酸甲酯应答的顺式调控元件和1个热胁迫应答元件等；组织特异性表达分析结果表明，GrDL7H基因主要在叶片中表达