OsRhoGDI2过表达转基因水稻的筛选鉴定 及外源基因拷贝数的初步分析

水稻Rho GDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因。为鉴定该基因的功能，笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP，并对水稻进行了遗传转化。对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T2代进行筛选和鉴定，采用PCR技术鉴定转基因植株，采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测OsRhoGDI2在转基因水稻中的表达水平，结果显示，其中6个株系为过表达转基因植株，OsRhoGDI2表达水平上调1.69～13.35倍。为检测外源基因在转基因水稻中的拷贝数，分别以蔗糖磷酸合成酶基因SPS和潮霉素抗性基因HYG为内参基因和标记基因，采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术结合内参基因和标记基因的标准曲线进行分析，结果显示在所检测的6个转基因株系中，外源基因的拷贝数均为1，提示已经获得稳定遗传的OsRhoGDI2过表达转基因水稻，为后续OsRhoGDI2基因的功能研究奠定基础