猪肺炎支原体纤毛黏附因子P97和F7-CTB对O型 口蹄疫灭活疫苗的免疫增强作用

旨在研究猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，简称Mhp)纤毛黏附因子P97以及F7鞭毛蛋白(flagellin，简称F)-霍乱毒素B亚基(cholera toxin B subunit，简称CTB)2种重组蛋白对口蹄疫(foot-and-mouth disease，简称FMD)灭活疫苗的免疫增强作用。通过体外表达获得pCold-F7-CTB、pET32a-P97-R1 2种重组蛋白，用间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA)方法检测pCold-F7-CTB蛋白的生物学活性，将重组蛋白分别与口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，简称FMDV)灭活抗原、口蹄疫灭活疫苗混合制备，皮下或腹腔接种Balb/c小鼠，共免疫2次，间隔3周。分别于免疫前、免疫后21、35、49 d采血，49 d后无菌摘取脾脏。采用阻断ELISA的方法检测小鼠血清口蹄疫O型病毒免疫球蛋白(IgG)抗体滴度，用流式细胞术检测脾淋巴细胞亚型比例，以评估免疫效力。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western Blot)分析结果表明，2种重组蛋白成功表达。用GMl(神经节苷脂)-ELISA方法验证pCold-F7-CTB的生物学活性，发现融合蛋白F7-CTB保留了与GMl的结合能力。小鼠免疫试验结果表明，经皮下注射接种后，单独口蹄疫病毒灭活抗原组没有产生明显的抗体水平，而F7-CTB免疫增强剂组比单独口蹄疫病毒灭活抗原组的IgG滴度更高。在试验中发现，当重组蛋白与口蹄疫灭活疫苗联合使用时，血清中的IgG滴度明显增高，CD3+CD8+T淋巴细胞比值上升；P97和F7-CTB混合使用对口蹄疫灭活疫苗的免疫增强效果最佳。可以初步得出，免疫增强剂P97和F7-CTB具有协同作用，皮下注射可显著提高FMD的特异性IgG水平，CD3+CD8+T淋巴细胞比值升高，显示其具有良好的应用前景