二十二碳六烯酸预处理增强血管生成素-1对氧糖剥夺条件下大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

摘要 目的 评价二十二碳六烯酸(DHA)预处理是否增强血管生成素-1(Ang-1)对氧糖剥夺(OGD)条件下大鼠脑微血管内皮细胞(BMVECs)的保护作用。 方法 大鼠BMVECs传代培养，第3～4代用于实验。采用随机数字表法分为7组：正常对照组、正常对照＋Ang-1组、OGD组、OGD＋Ang-1组、OGD＋DHA组、OGD＋DHA＋Ang-1组、OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组。在正常对照组和正常对照＋Ang-1组加入含血清、5 mmol/L葡萄糖和1.25 mmol/L丙酮酸盐的DMEM培养液；在各OGD组用无糖、无血清的DMEM液置换原培养液。在OGD＋DHA、OGD＋DHA＋Ang-1和OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组加入40 μmol/L DHA，同时在OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组再加入5 μmol/L GW9662[过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)的抑制剂]，以上3组在5% CO2和95%空气条件下预处理培养1 h。预处理完成后，在正常对照＋Ang-1组、OGD＋Ang-1组、OGD＋DHA＋Ang-1组和OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组加入浓度为250 ng/ml的Ang-1。除正常对照组和正常对照＋Ang-1组在5% CO2和95%空气条件下培养外，其余各组均在94% N2∶5% CO2∶1% O2低氧条件下培养，培养时间均为24 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot检测Bax、Bcl-2、半胱天冬酶-3(caspase-3)、血管生成素受体-1(Tie-1)、Tie-2、磷酸化的Tie-2(pTie-2)、磷酸化的蛋白激酶B(pAkt)和紧密连接蛋白-1(ZO-1)的表达水平。 结果 与正常对照组比较，OGD、OGD＋Ang-1、OGD＋DHA、OGD＋DHA＋Ang-1和OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组细胞凋亡显著增加(P＝0.000、0.000、0.000、0.004、0.000)；Bax、caspase-3、Tie-1表达显著增加(Bax：0.62±0.03、0.38±0.03、0.45±0.03、0.26±0.02、0.33±0.02比0.16±0.01；caspase-3：0.76±0.05、0.42±0.04、0.52±0.02、0.32±0.02、0.40±0.02比0.15±0.01；Tie-1：0.51±0.03、0.25±0.01、0.33±0.02、0.16±0.01、0.22±0.02比0.12±0.01；P均＝0.000)；Bcl-2、Bcl-2/Bax、Tie-2、pTie-2表达均显著降低[Bcl-2：0.09±0.01、0.20±0.01、0.16±0.02、0.31±0.01、0.22±0.01比0.34±0.01；Bcl-2/Bax：(14.93±1.86)%、(68.03±5.56)%、(36.93±2.22)%、(119.1±13.3)%、(64.23±6.07)%比(208.33±7.37)%；Tie-2：0.07±0.01、0.16±0.02、0.11±0.01、0.21±0.01、0.18±0.01比0.26±0.01；pTie-2：0.05±0.01、0.15±0.01、0.07±0.01、0.22±0.02、0.16±0.01比0.27±0.01；P均＝0.000]，OGD、OGD＋Ang-1、OGD＋DHA和OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组的pAkt、ZO-1表达亦显著降低(pAkt：0.13±0.01、0.26±0.01、0.14±0.01、0.28±0.02比0.39±0.02；ZO-1：0.08±0.01、0.18±0.01、0.10±0.01、0.19±0.01比0.23±0.02；P均＝0.000)。与OGD组比较，OGD＋Ang-1和OGD＋DHA＋Ang-1组细胞凋亡显著降低(P均＝0.000)。与正常对照＋Ang-1组比较，OGD＋Ang-1和OGD＋DHA＋Ang-1组pTie-2、pAkt、ZO-1表达显著降低(pTie-2：0.15±0.01、0.22±0.02比0.52±0.02；pAkt：0.26±0.01、0.37±0.04比0.67±0.05；ZO-1：0.18±0.01、0.24±0.02比0.39±0.05；P均＝0.000)。与OGD＋Ang-1组比较，OGD＋DHA＋Ang-1组细胞凋亡显著降低(P＝0.000)，Bax、caspase-3、Tie-1表达显著降低(P均＝0.000)，Bcl-2、Bcl-2/Bax、Tie-2、pTie-2、pAkt、ZO-1表达显著增加(P均＝0.000)；OGD＋DHA＋GW9662＋Ang-1组上述指标差异无统计学意义(P＝0.202、0.770、0.382、0.448、0.233、0.736、0.143、0.526、0.495、0.670)。 结论 DHA预处理可提高Ang-1对OGD环境下大鼠BMVECs的保护作用，其机制可能与激活PPAR-γ、降低Tie-1表达，从而增强对Tie-2的激活作用相关