大鼠骨髓间充质干细胞条件培养基对HepG 2细胞胰岛素抵抗的影响

摘要 目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSCs–CM)对人HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)的影响，并探讨其分子机制。 方法 根据葡萄糖利用情况筛选出最佳造模剂使用浓度及时间；以正常HepG2细胞为空白对照，给予棕榈酸处理的细胞为IR模型组，加入BMSCs–CM为条件培养基(CM)干预组，而加入同样经半透膜浓缩后的低糖培养基作为阴性对照组，分别采用细胞培养、糖原染色、葡萄糖及糖原检测试剂盒等方法来分析各组葡萄糖利用情况；免疫印迹法观察BMSCs–CM对IR HepG2细胞磷酸化的胰岛素受体底物(p–IRS)、磷脂酰肌醇–3–激酶(PI3K)与磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p–AKT)蛋白表达的影响；分别加入PI3K抑制剂LY294002及激动剂740Y–P后继续观察上述胰岛素信号蛋白的变化情况。 结果 (1)以0.25 mmol/L棕榈酸作用HepG2细胞24 h的方法成功建立IR模型；IR模型组培养液中葡萄糖含量明显高于空白对照组，其细胞内糖原含量也显著减少(P<0.05)。(2)与IR模型组相比，CM干预组HepG2/IR葡萄糖的摄取与利用明显改善(P<0.05)，而在阴性对照组则差异没有统计学意义。(3)CM干预组p–IRS、PI3K与p–AKT的蛋白表达水平显著高于IR模型组(P< 0.05)；而在加入LY294002阻断PI3K后，给予BMSCs–CM后PI3K及p–AKT蛋白含量则未增加；进一步加入740Y–P过度激活PI3K后，则这些蛋白的表达水平较IR模型组显著升高。 结论 大鼠BMSCs–CM的胰岛素增敏作用与p–IRS、PI3K与p–AKT蛋白的表达增强有关