主要黄病毒E蛋白抗原表位分析与初步鉴定

目的对主要黄病毒结构蛋白的抗原表位情况进行系统分析，鉴别共同及特异性抗原表位并对可能的特异性抗原表位进行原核表达。方法分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎(乙脑)病毒及黄热病毒E蛋白的亲水性、抗原性、可塑性、表面可及性和Garnier-Robson的二级结构进行分析，预测可能的抗原表位。在此基础上，根据表位位置和氨基酸序列的相似性，分析6种病毒的共有及特异性抗原表位，并参考GenBank中的序列信息，对预测的抗原表位进行比对，进一步分析抗原表位在不同病毒株中的保守性。然后利用pET32及pMAL-c2x系统对可能的特异性抗原表位进行高效原核表达、Westernblot验证其抗原性。结果经系统的生物信息学分析，共预测获得登革病毒1～4型、乙脑病毒及黄热病毒共有抗原表位15个，病毒特异性抗原表位47个。利用pET32及pMAL-c2x系统对6种病毒部分可能的特异性抗原表位进行了高效表达。Westernblot结果显示登革病毒1型及2型表达抗原片段表现良好的抗原反应原性，并与试验中所用其他黄病毒及甲病毒多克隆抗体无明显的交叉反应。而所表达的登革病毒3型和4型、乙脑病毒及黄热病毒片段无抗原反应原性。结论6条原核表达抗原片段经Westernblot验证，获得登革病毒1型和2型特异性抗原片段