应用Taq Man荧光定量聚合酶链反应技术检测鼠疫耶尔森菌

目的发展一种快速、敏感、特异的检测鼠疫耶尔森菌方法。方法应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术,针对pMT1质粒上的caf1基因,pPCP1质粒上的pla基因,染色体上的与色素沉着相关的hms基因和侵袭素inv基因设计TaqMan引物探针,进行荧光定量PCR检验,评价方法的特异性、敏感性;构造并应用上述引物探针的外标对照定量;构造pla的内标对照,采用多重荧光定量PCR(FAM,VIC荧光检测),发现假阴性;采用UDG抗污染、ROX参照荧光染料矫正背景噪音,提高检验能力;检验模拟鼠疫耶尔森菌强毒株和EV菌感染的动物脾脏器样本,评价该法在实际工作的应用。结果设计的引物、探针特异性良好,pla、f1、hms指标的敏感性分别是最低检出10拷贝、1拷贝、1拷贝。结论该方法能快速、灵敏、特异检出鼠疫耶尔森菌,对鼠疫监测、预防生物恐怖等方面具有重要意义