多重逆转录-聚合酶链反应快速检测登革病毒及其临床应用

目的建立登革1～4型病毒的多重逆转录聚合酶链反应(RTPCR)快速检测及分型方法。方法参照登革1～4型病毒核酸序列设计多重RTPCR引物,并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对PCR反应条件进行优化,以同属于黄病毒科的黄热病毒、流行性乙型脑炎病毒为对照,验证其特异性。并对2003年30份临床疑似登革患者血清标本进行了检测,阳性片段克隆测序验证扩增片段特异性。结果采用多重PCR引物对登革1～4型病毒进行扩增,分别获得295、237、118、347bp片段,与设计相符;而黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒均无非特异性扩增条带,对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果,30份疑似患者血标本RTPCR扩增阳性率为83.3%(25/30),其核酸序列与登革1型病毒柬埔寨株以及中国1997、1999年流行株GD14/97、GD05/99同源性分别为97%、97%、98%。结论实验证明,所建立的多重PCR方法能够快速地检测和鉴定登革1～4型病毒,为登革病毒的检测及分型提供了一种方便易行的方法