泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法的—立及应用

目的 建立泰泽氏菌的TaqMan小沟结合物(MGB)探针荧光定量PCR检测方法。方法 针对泰泽氏菌16SrRNA基因的保守区设计特异性引物和探针, 建立MGB探针荧光定量PCR方法, 并验证该方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008—2011年采集的1156份临床样本进行检测, 同时进行普通PCR检测作为对照。结果 泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性, 与肝螺杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌之间无交叉反应, 检测灵敏度达2.2copy/nl。标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系, 相关系数为0.999, 斜率为-3.204, PCR效率为100%。对1156份临床样本进行检测, 荧光定量PCR检出101份泰泽氏菌阳性样本, 而普通PCR则仅检出44份。荧光定量PCR方法从临床样本中检出泰泽氏菌DNA仅需2h。结论 TaqManMGB探针荧光定量PCR方法具有特异、灵敏和稳定性, 适于泰泽氏菌的快速检测