恙虫病东方体56kDa抗原基因片段在不同载体的表达

目的　构建恙虫病东方体56kDa表面抗原基因(sta56)片段在不同载体的重组表达质粒，在E.coli中表达sta56重组抗原并比较不同表达系统对sta56的表达效果。方法　从含有恙虫病东方体Karp株sta56基因的重组克隆，扩增出不同长度的截短的sta56片段，定向插入pPROEX HTb及pET30a载体，转化大肠埃希菌DH5a或BL21(DE3)，IPTG诱导表达，应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白表达情况，应用蛋白印迹(WB)方法分析重组抗原的活性。结果 成功构建含sta56不同长度片段的重组表达质粒pHTbOt957、pHTbOt498、pHTbOt342和pETOt957、pETOt498、pETOt342,各重组子均可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达，SDS-PAGE显示各表达重组子表达不同分子量的重组蛋白，WB证实各重组蛋白均能被恙虫病患者阳性血清所识别。结论　恙虫病东方体Karp株sta56基因可在大肠埃希菌获得高效表达，pET30a对sta56的表达效果优于pPROEX HTb；重组蛋白具有免疫反应性，纯化后可用作免疫诊断抗原