北海道型汉坦病毒核蛋白基因的克隆表达及其免疫原性

构建北海道型汉坦病毒(HOKV)核蛋白(NP)基因的重组杆状病毒表达载体，在昆虫细胞中表达出具有免疫原性的抗原，用于HOKV的检测及诊断。方法应用RT-PCR方法扩增HOKVFusong-Cr-247株的NP基因，并将该基因片段克隆到PCR[R]2。1TA载体，转化到OneShortTMTOP10感受态细胞构建TA克隆载体，并与pFastBacTM1转座质粒载体分别用KpnI和NotI双酶切，用T4连接酶连接，构建pFastPUUV-S重组转座质粒，经双酶切、PCR扩增及插入序列方向鉴定后。转化到DH10BacTME。coli感受态细胞，经三抗培养基筛选和PCR扩增鉴定后获得重组Bacmid质粒，将重组Baemid质粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒毒液，并继续扩增重组杆状病毒，以第三代毒液感染Sf9昆虫细胞，96h后收获细胞。用间接免疫荧光(IFA)、SDS-PAGE和Westernblot对表达产物进行鉴定和分析