问号钩端螺旋体lipL41基因表达及重组抗原分析

目的构建问号钩端螺旋体(钩体)ltB/ctBlipL41/1融合基因及其原核表达系统。方法采用连接引物聚合酶链反应(PCR)构建ltBlipL41/1和ctBlipL41/1融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的重组蛋白rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1表达情况;用免疫印迹和神经节苷脂酶联免疫吸附试验(GM1ELISA)分别检测上述目的重组蛋白的免疫原性和佐剂活性;采用PCR和显微镜凝集试验(MAT)分别检测97株问号钩体野生株lipL41/1基因及其表达情况;用ELISA检测228例钩体患者血清lipL41基因产物的抗体。结果与报道的相关序列比较,ltBlipL41/1和ctBlipL41/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%～99.9%和99.8%～100%。rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1表达产量均约为细菌总蛋白的10%,主要以包涵体形式存在。rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1均分别能与rLipL41/1兔抗血清和牛GM1结合。87.6%(85/97)问号钩体野生株含有lipL41基因,84.5%(82/97)问号钩体野生株分别与rLipL41/1和rLipL41/2兔抗血清出现效价范围为1∶4～1∶128的MAT阳性结果。84.6%(193/228)和78.5%(179/228)的患者血清分别rLipL41/1和rLipL41/2抗体阳性。结论成功地构建了ltBlipL41/1和ctBlipL41/1融合基因及其原核表达系统。所表达的rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1融合蛋白有良好的免疫原性和佐剂活性。lipL41基因存在于不同问号钩体血清群中并高频率表达。rLTBrLipL41/1和rCTBrLipL41/1具有成为钩体属特异性疫苗抗原的良好前景