三氯乙烯对人正常肝细胞亚细胞蛋白质组影响的研究

目的 研究三氯乙烯(trichloroethylene)对人正常肝细胞系(L-02细胞)亚细胞蛋白质组的影响，探讨其潜在肝毒性作用机制。 方法 采用0和8.0 mmol/L的三氯乙烯处理细胞后，分别提取三氯乙烯处理前后L-02细胞的细胞膜和细胞核总蛋白质，通过差异荧光双向凝胶电泳(2D-DIGE)筛选出差异点，运用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)对差异蛋白点进行质谱鉴定。采用生物信息学方法对差异蛋白进行跨膜结构域(transmembrane domain)和基因本体(gene ontology，GO)功能聚类的分析，用Western blot分析验证不同浓度三氯乙烯处理下膜蛋白ATP合成酶β亚基(ATP5B)、核蛋白核不均一核糖核蛋白H2(hnRNP H2)和上游识别序列结合蛋白1(FUBP1)在L-02细胞中表达情况。 结果 三氯乙烯作用于L-02细胞24 h后，鉴定出差异表达膜蛋白14个和差异表达核蛋白18个，在使用0、2.0、4.0和8.0 mmol/L的三氯乙烯处理细胞后，ATP5B蛋白相对表达量分别为1.00 ±0.03、1.21±0.14、1.25±0.12、1.48±0.17( F ＝8.51， P ＝0.007)；hnRNP H2蛋白相对表达量分别为1.00±0.09、1.22±0.15、1.43±0.21、1.53±0.17( F ＝6.57， P ＝0.015)；FUBP1蛋白相对表达量分别为1.00±0.11、0.91±0.07、0.73±0.04、0.67±0.03( F ＝15.81， P ＝0.001)。生物信息分析显示，差异表达蛋白参与的生物学过程中，差异蛋白主要聚集在RNA加工(差异蛋白数为10个， P ＝2.46×10 -6)，特别是在RNA剪接上(差异蛋白数9个， P ＝1.77×10 -7)。 结论 三氯乙烯处理可以引起亚细胞蛋白质组的改变，而这些与RNA剪接相关蛋白的异常表达为进一步研究三氯乙烯的肝毒性作用机制提供了新的线索