肠道病毒71型外壳蛋白VP2基因重组表达及活性鉴定

目的 克隆表达肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP2，鉴定重组蛋白免疫活性，为EV71血清学检测试剂和疫苗研究提供依据。 方法 利用PCR技术从EV71/Henan/106/2009河南分离株基因组扩增VP2基因，经酶切连接到表达载体pMAL–c2X中，转化大肠杆菌( E . coli TB1)；用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达，并对重组蛋白进行纯化，SDS–PAGE和Western blotting方法对重组蛋白分析鉴定其免疫活性；建立ELISA检测EV71 IgM抗体方法，检测手足口病患儿急性期中和抗体阳性血清60份，其中阳性52份，阴性8份；检测临床诊断手足口病患儿急性期血清标本88份。 结果 PCR方法扩增的VP2基因长度约为762 bp；经酶切鉴定插入到表达载体的基因片段与预期目的片段相一致；SDS–PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为71 500；经大肠杆菌高效表达和纯化获得了重组蛋白EV71–VP2，通过Western blotting分析，该重组蛋白与手足口病患者血清反应产生特异杂交带；建立ELISA检测方法的灵敏度为87%，特异度为83%。在临床诊断的88份手足口病患儿急性期血清标本中，抗EV71–IgM阳性48份，阳性率为55%。 结论 本研究成功克隆并构建了EV71 VP2基因高效原核表达系统，初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性，为EV71诊断试剂的研究奠定了基础