核糖基化在六价铬致细胞损害中的作用机制探讨

目的探讨聚ADP核糖基化在Cr(Ⅵ)致细胞损害中的作用。方法选用前期建立的聚ADP核糖水解酶（PARG）缺陷的人支气管上皮细胞（16HBE细胞）作为研究对象，选用不同剂量的Cr(Ⅵ)分别染毒，并处理正常16HBE细胞和PARG缺陷细胞24 h，同时设立溶剂对照组，比较两种细胞对Cr(Ⅵ)毒作用的差异；在此基础上，选取50 μmol/L的 Cr(Ⅵ)作为染毒剂量，染毒处理两种细胞后，提取细胞总蛋白进行双向荧光差异凝胶电泳（2DDIGE）分析，计算比较两种细胞染毒前、后的总蛋白表达差异，对差异蛋白点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱（MALDITOFMS/MS）鉴定，并进一步使用Western blot验证。 结果Cr(Ⅵ)作用后，PARG缺陷细胞的存活较正常16HBE细胞多，当作用剂量达到50 μmol/L时，16HBE 细胞和PARG 缺陷细胞的存活率分别为（5967±643）%和（8200±625）%，两者之间的差异有统计学意义（t=-432，P<005）；2DDIGE分析比较正常16HBE细胞与PARG缺陷细胞Cr(Ⅵ)染毒前、后蛋白差异，共筛选且成功鉴定出18个蛋白，这些蛋白的功能涉及维持细胞形态、参与能量代谢、DNA损伤修复以及基因表达调控。Western blot成功验证出差异表达蛋白cofilin1，其在染毒后的16HBE细胞中表达上调，相对表达量为141±004，对照组表达量为100±001，差异有统计学意义（t=-1800, P<005）。在PARG缺陷细胞表达差异无统计学意义（t=-861，P>005）。 结论鉴定出的差异蛋白大多与肿瘤发生密切相关，推测聚ADP核糖基化反应可通过抑制Cr(Ⅵ)诱导的肿瘤发生从而对抗Cr(Ⅵ)的细胞毒性，这为阐明聚ADP核糖基化在Cr(Ⅵ)致细胞损害中的作用机制提供了重要的参考依据