α-生育酚对亚硝胺诱导人食管上皮细胞癌变早期NFκB和Nrf2信号通路的调节作用

目的 研究α-生育酚（α-tocopherol, α-T）对亚硝胺诱导人食管上皮细胞癌变早期NFκB和Nrf2信号通路的调节作用。 方法 采用N-甲基苄基亚硝胺（N-nitrosomethylbenzylamine, NMBzA）染毒人正常食管上皮细胞（HET-1A）模拟食管癌变启动，染毒浓度为50、100 μmol/L，染毒时间为24 h。α-T干预组细胞在染毒前3 h加入25、50、100 μmol/L的α-T进行预处理，然后与100 μmol/L NMBzA共同孵育24 h；人食管鳞癌细胞（EC109）细胞采用相同浓度的α-T进行处理并与HET-1A进行对比；以体积分数为0.1%二甲基亚砜（DMSO）处理组细胞作为对照组。采用细胞免疫荧光试验分析NFκB p65和Nrf2在细胞内的分布和活化状态，采用RT-PCR或Western blot法检测细胞周期素D1(cyclinD1）、核蛋白KI67(KI67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、环氧化酶2(COX2）、5脂氧合酶（5LOX）、血红素加氧酶1(HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）、谷胺酸半胱氨酸连接酶（GCLC）等相关靶基因表达水平，采用流式细胞术检测细胞内活性氧水平。 结果 HET-1A细胞经100 μmol/L NMBzA染毒后，CyclinD1、KI67、PCNA基因表达水平分别为2.99±0.15、2.35±0.38、2.46±0.25，均高于对照组（1.00±0.08）（F值分别为97.23、65.28、34.62，P值均 <0.001）；与对照组(0)相比，NFκB p65(71.0%，98/138）和Nrf2(36.3%，49/135）在细胞核内的分布比例增加（χ 2值分别为194.71、133.72，P值均<0.001）。与对照组（1.00± 0.05）相比，HET-1A靶基因COX2(3.22±0.17）、5LOX(2.87±0.12）和HO-1(1.87±0.22）、NQO1(2.14± 0.08）、GCLC(2.63±0.41）蛋白表达水平均升高（F值分别为72.35、43.87、69.23、71.34、85.79，P值分别为0.013、0.015、0.010、0.011、0.002）。50 μmol/L α-T干预处理后，与100 μmol/L NMBzA组（71.0%，98/138）相比，NFκB p65在核内分布（7.7%，8/104）减少（χ 2=148.10, P<0.001），其靶基因COX2(0.74± 0.19）、5LOX(0.42±0.13）蛋白表达水平降低（F值分别为56.31、73.25，P值分别为0.003、0.001）；而Nrf2信号通路相关指标未出现改变（P值均>0.05）；α-T对EC109细胞中NFκB和Nrf2信号通路均无影响（P值均>0.05）。 结论 在NMBzA诱发食管癌早期，α-T能够通过阻断NFκB信号通路的激活从而抑制癌变启动，可能是α-T对食管癌潜在预防作用的主要机制；食管癌发病过程中，细胞可能因Nrf2信号通路的激活而获得了适应氧化应激的能力