三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统的建立及评价

目的 建立三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统，并评价其在检测HPV九价疫苗免疫血清免疫原性的应用。 方法 分别选取红色、绿色和蓝色荧光蛋白的质粒N31-MCHREEY、N31-EGFP和N31-mTagBFP构建HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒，利用双抗夹心法和病毒半数组织培养感染剂量法检测HPV假病毒浓度和感染滴度；利用单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒，检测HPV九价疫苗免疫小鼠血清的中和滴度，以验证三色混合荧光HPV假病毒系统的准确性；采用单色荧光和三色混合荧光HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒系统检测HPV九价疫苗免疫食蟹猴血清的中和滴度，判断其是否可应用于HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测。 结果 含有绿色、红色和蓝色荧光质粒的HPV16型假病毒的浓度为5~6 μg/ml，HPV6/11/18/31/33/45/52/58的三色混合荧光假病毒浓度为1~3 μg/ml。获得了分别含有EGFP、Mcherry和mTagBFP报告基因的9个型别的HPV假病毒，且满足中和检测需要；9个型别单色荧光HPV假病毒的滴度值均在1×10 4~1×10 5之间，即它们具有相似的感染滴度。检测HPV九价疫苗免疫的小鼠血清时，单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒系统所得中和滴度值差异均无统计学意义（ P 值均>0.05）；检测HPV九价疫苗免疫的食蟹猴血清时，单色荧光与三色混合荧光A、B和C组HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒所得中和滴度值差异均无统计学意义（ P 值均>0.05）。 结论 成功地建立了三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统；验证其与单色荧光HPV假病毒系统具有一致性；证实其可应用于检测HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测中