游离脂肪酸和铁诱导非酒精性脂肪肝病的协同作用机制研究

目的 采用游离脂肪酸(FFA)和Fe 2＋诱导肝细胞建立非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型，探讨FFA和Fe 2＋在NAFLD发病过程中是否具有协同作用及其作用机制。 方法 设置对照组(细胞正常培养)，0.250、0.500、1.000 mmol/L油酸组，以及0.500 mmol/L油酸＋0.125 mmol/L Fe 2＋、0.500 mmol/L油酸＋0.250 mmol/L Fe 2＋、0.500 mmol/L油酸＋0.500 mmol/L Fe 2＋组，分别处理人肝癌HepG2细胞，采用油红O染色观察细胞脂质沉积，以磷酸甘油氧化酶法(GPO–PAP)测定细胞内TG的含量，采用RT–PCR法检测脂肪酸β–氧化的关键基因[脂酰CoA合成酶(ACSL–1)、肉碱棕榈酰基转移酶(CPT–1a)、脂肪酸合成酶(FAS)]的表达。分析不同组别TG含量，以及ACSL–1、CPT–1a、FAS mRNA相对值的差异。 结果 油红O染色结果显示，浓度为0.500 mmol/L的油酸分别与不同浓度Fe 2＋共同处理HepG2细胞后，随着Fe 2＋浓度的增加，细胞内脂滴含量逐渐增多。对照组、0.250、0.500、1.000 mmol/L油酸、0.500 mmol/L油酸＋0.125 mmol/L Fe 2＋、0.500 mmol/L油酸＋0.250 mmol/L Fe 2＋、0.500 mmol/L油酸＋0.500 mmol/L Fe 2＋组HepG2细胞中TG含量分别为(90.0±1.6)、(131.7±5.4)、(153.7±3.0)、(254.1±4.0)、(164.5±6.0)、(180.1±7.7)、(235.6±4.5) nmol/mg( F ＝396.00， P <0.05)。0.500 mmol/L油酸、0.500 mmol/L油酸＋0.125 mmol/L Fe 2＋、0.500 mmol/L油酸＋0.250 mmol/L Fe 2＋、0.500 mmol/L油酸＋0.500 mmol/L Fe 2＋组HepG2细胞ACSL–1 mRNA的表达水平分别为0.94±0.02、0.89±0.04、0.85±0.02、0.74±0.04( F ＝50.00， P <0.05)，CPT–1a mRNA分别为0.89±0.03、0.79±0.05、0.67±0.04、0.51±0.05( F ＝79.00， P <0.05)；FAS mRNA分别为1.31±0.05、1.44±0.03、1.51±0.05、1.56±0.06 ( F ＝79.70， P <0.05)。 结论 用一定浓度的FFA和Fe 2＋培养HepG2细胞，能够诱导NAFLD模型，二者可能通过影响脂肪酸的β–氧化共同参与NAFLD的发病过程